חיץ TBE (טריס-בוראט-EDTA) הוא תמיסת חיץ המורכבת מבסיס טריס, חומצה בורית ו- EDTA (חומצה אתילנדינטינט-אצטטית). מאגר זה משמש לעיתים קרובות לאלקטרופורזה של ג'ל אגרוז בניתוח של מוצרי DNA הנובעים מהגברה של PCR, פרוטוקולי טיהור DNA או ניסויים לשיבוט DNA.
שימושים ב- TBE
חיץ TBE שימושי במיוחד להפרדת שברי DNA קטנים יותר (MW <1000), כמו מוצרים קטנים של אנזים הגבלה עיכולים. ל- TBE יכולת חציצה גדולה יותר והיא תעניק רזולוציה חדה יותר מאשר חיץ TAE. חיץ TAE (טריס-אצטט-EDTA) הוא פיתרון המורכב מבסיס טריס, חומצה אצטית ו- EDTA.
בדרך כלל TBE יקר יותר מ- TAE ומעכב את ליגאזת ה- DNA שעלולה לגרום לבעיות אם נועדו צעדים נוספים לטיהור DNA וקישור. עם שלושת הצעדים הפשוטים הבאים, למד כיצד ליצור חיץ TBE. לא צריך לקחת יותר משלושים דקות כדי ליצור.
מה אתה צריך
כדי להפוך חיץ TBE תצטרך רק ארבעה חומרים. שאר הפריטים ברשימה זו הם ציוד. ארבעת החומרים הנדרשים הם מלח נתרן EDTA, בסיס טריס, חומצה בורית ומים מיוניזים.
באשר לציוד, תצטרך מד pH ותקני כיול, לפי הצורך. בנוסף, תרצו כמה כוסות או צלוחיות של 600 מיליליטר ו 1500 מיליליטר. עיגול צרכי הציוד שלך הם צילינדרים מדורגים, מוטות מערבבים וצלחות מערבבים.
בדוק את המלאי במעבדה בה אתה משתמש כדי לוודא שיש לך את כל מה שאתה צריך לפני שתתחיל. אין דבר גרוע יותר מלהצטרך להפסיק באמצע הכנת פיתרון מכיוון שנגמר לך החומרים המתאימים.
אם המעבדה שלך בבית הספר או באתר העבודה שלך, בדוק עם אנשי הצוות הראויים כדי לראות שיש להם את כל הפריטים במלאי. פעולה זו עשויה לחסוך לכם זמן ואנרגיה בסופו של דבר.
משקל הנוסחה מקוצר ל- FW. זהו המשקל האטומי של יסוד כפול מספר האטומים של כל יסוד בנוסחה, ואז הוא מוסיף את כל ההמונים של כל יסוד יחד.
פתרון מלאי של EDTA
יש להכין פיתרון של EDTA מראש. EDTA לא תיכנס לתמיסה לחלוטין עד שה pH יותאם לכ- 8.0. לקבלת תמיסה של 500 מיליליטר מלאי של 0.5 M EDTA, שקלו 93.05 גרם של מלח נתרן EDTA (FW = 372.2). לאחר מכן ממיסים אותו ב -400 מיליליטר מים מיוניזים ומתקנים את החומציות עם NaOH (נתרן הידרוקסיד). לאחר מכן יש למלא את הפיתרון לנפח סופי של 500 מיליליטר.
פתרון מלאי של TBE
הכינו תמיסת מלאי מרוכזת (5x) של TBE על ידי שקילה של 54 גרם בסיס טריס (FW = 121.14) ו- 27.5 גרם של חומצה בורית (FW = 61.83) ומתמוסס בשני 900 מיליליטר של deionised מים. לאחר מכן להוסיף 20 מיליליטר של 0.5 מ '(מולאריות, או ריכוז) EDTA (pH 8.0) והתאם את הפתרון לנפח סופי של 1 ליטר. ניתן לאחסן פיתרון זה בטמפרטורת החדר אך נוצר משקעים בפתרונות ישנים. יש לאחסן את החיץ בבקבוקי זכוכית ולהשליך אם נוצרה משקעים.
פיתרון עבודה של TBE
עבור אלקטרופורזה ג'ל של agarose, ניתן להשתמש במאגר TBE בריכוז של 0.5X (דילול של 1:10 של המלאי המרוכז). מדללים את תמיסת המניה בעשרהX במים מיובשים. ריכוזי המומסים הסופיים הם 45 mM טריטיס-בוראט ו- 1 mM (מילימולרי) EDTA. המאגר מוכן כעת לשימוש ב מריץ ג'ל אגרוז.