מלוחים מאוגזים בזרחן (PBS) הוא פיתרון חיץ זה משמש בדרך כלל לכתמים אימונוהיסטוכימיים (IHC) ולעיתים קרובות הוא משמש במחקר ביולוגי. PBS הוא תמיסת מלח על בסיס מים המכילה נתרן מימן פוספט, נתרן כלוריד, ובמקרים מסוימים, אשלגן כלוריד ואשלגן דיהידרוגן פוספט.
מכתים אימונוהיסטוכימיים
אימונוהיסטוכימיה מתייחסת לתהליך גילוי אנטיגנים כמו חלבונים בתאים של א באמצעות רקמות הנוגדנים הנקשרים באופן ספציפי לאנטיגנים בביולוגיה רקמות. מכתים חיסוני-פלואורסצנטיים היו שיטת ההכתמה החיסונית הראשונה.
אנטיגנים נראים לעין כאשר מצורפים נוגדנים המשתמשים בצבעי פלואורסצנציה בגלל תגובה נוגדת נוגדן-קשירה. תהליך זה מתרחש כאשר הוא מופעל על ידי אור מרגש באורך גל מסוים במיקרוסקופ פלואורסצנטי.
ריכוזי האוסמולולריות והיונים של הפתרונות תואמים את אלה של גוף האדם - הם איזוטוניים.
מתכון למאגר PBS
אתה יכול להכין PBS בכמה דרכים. ישנן נוסחאות מרובות. חלקם אינם מכילים אשלגן, בעוד שאחרים מכילים סידן או מגנזיום.
המתכון הזה יחסית קל. זה מיועד לפתרון מניות 10X PBS (0.1M). עם זאת, אתה יכול גם ליצור פתרון מלאי של 1X, או להתחיל עם מתכון 10X זה ולדלל אותו ל- 1X. כל התהליך אורך כעשר דקות ומסופק גם אפשרות להוסיף Tween.
מה שתצטרך בכדי להפוך חיץ PBS
- נתרן פוספט חד-מונסי (נטול מים)
- נתרן פוספט דיבאסי (נטול מים)
- נתרן כלורי
- קנה מידה ושקל סירות
- מערבבים מגנטיים ומוט מערבבים
- בדיקת pH המכווסת ופתרונות מתאימים להתאמת pH
- בקבוק נפח 1L
- בין 20 (לא חובה)
כיצד להכין חיץ PBS
- שוקלים 10.9 גרם נתרן פוספט דיבאסי נטול מים (Na2HPO4), 3.2 גרם נתרן פוספט מים נטול מים (NaH2PO4), ו -90 גרם נתרן כלורי (NaCl). ממיסים במים מזוקקים מתחת ל -1 ליטר.
- התאם את ה- pH ל 7.4 והפך את הפיתרון לנפח סופי של 1 ליטר.
- יש לדלל 10X לפני השימוש ולהתאים את ה- pH במידת הצורך.
- אתה יכול ליצור פיתרון PBS המכיל 0.5 אחוז Tween 20 על ידי הוספת 5 מ"ל Tween 20 לפתרון 1L.
טיפים להכנת חיץ PBS
אחסן את המאגר בטמפרטורת החדר לאחר שביצעת את פתרון ה- PBS.
ניתן להחליף ריאגנטים שאינם מים נטולי מים, אך תצטרך לחשב מחדש את המסה המתאימה של כל אחד כדי להכיל את מולקולות המים שנוספו.
שימושים במאגר PBS
מלוחים מאוכלים בזרחן הם בעלי שימושים רבים מכיוון שזה איזוטוני ולא רעיל לרוב התאים. ניתן להשתמש בו כדי לדלל חומרים ולעיתים קרובות הוא משמש לשטיפת מיכלי תאים. PBS יכול לשמש כדילול בשיטות שונות לייבוש מולקולות ביולוגיות מכיוון שמולקולות המים שבתוכו יהיו מובנות סביב החומר - למשל חלבון. זה יהיה "מיובש" ומונע למשטח יציב.
ה- pH נשאר יציב ועקבי כדי למנוע הרס של תאים.
סרט המים הדק שנקשר לחומר מונע denaturation או שינויים קונפורמטיביים אחרים. מאגרי פחמן יכולים לשמש לאותה מטרה אך בפחות יעילות.
ניתן להשתמש ב- PBS גם כדי לקחת ספקטרום ייחוס בעת מדידת ה- חלבון ספיחה באליפסומטריה.