PBS או חיץ פוספט מלח הוא פיתרון חיץ זה חשוב במיוחד מכיוון שהוא מחקה את ריכוז היונים, האוסמולולריות וה- pH של נוזלי גוף האדם. במילים אחרות, זה איזוטוני לפתרונות אנושיים, כך שפחות סביר לגרום לנזק לתאים, רעילות או משקעים לא רצויים במחקר ביולוגי, רפואי או ביוכימי.
הרכב כימי של PBS
ישנם מספר מתכונים להכנת פיתרון PBS. הפיתרון החיוני מכיל מים, נתרן מימן פוספט, ו נתרן כלורי. חלק מהתכשירים מכילים אשלגן כלוריד ופוספט אשלגן דיהידרוגן. ניתן להוסיף EDTA גם בהכנה סלולרית למניעת גושים.
מלוחים עם מאגרי פוספט אינם אידיאליים לשימוש בפתרונות שמכילים קטיונים דו-ערכיים (Fe2+, זן2+) מכיוון שיכולה להיווצר משקעים. עם זאת, כמה פתרונות PBS אכן מכילים סידן או מגנזיום. כמו כן, זכור כי פוספט עשוי לעכב תגובות אנזימטיות. שימו לב במיוחד לחיסרון הפוטנציאלי הזה כשאתם עובדים עם DNA. בעוד ש- PBS מצוין למדע פיזיולוגי, שימו לב שהפוספט במדגם חוצץ PBS עשוי לזרז אם המדגם מעורבב עם אתנול.
להרכב כימי טיפוסי של 1X PBS יש ריכוז סופי של 10 mM PO43−, 137 mM NaCl, ו- 2.7 mM KCl. להלן הריכוז הסופי של ריאגנטים בתמיסה:
| מלח | ריכוז (mmol / L) | ריכוז (גרם / ל ') |
|---|---|---|
| NaCl | 137 | 8.0 |
| KCl | 2.7 | 0.2 |
| נא2HPO4 | 10 | 1.42 |
| KH2פו4 | 1.8 | 0.24 |
פרוטוקול להכנת מי מלח עם זרחן
בהתאם למטרתך, אתה יכול להכין PX 1X, 5X או 10X. אנשים רבים פשוט רוכשים טבליות חוצץ PBS, ממיסים אותם במים מזוקקים ומתאימים את רמת החומציות לפי הצורך עם חומצה הידרוכלורית או נתרן הידרוקסידי. עם זאת, קל לבצע את הפיתרון מאפס. להלן מתכונים למי מלח 1X ו- 10X חוצץ פוספט:
מגיב |
כמות להוסיף (1 ×) |
ריכוז סופי (1 ×) |
סכום להוסיף (10 ×) |
ריכוז סופי (10 ×) |
| NaCl | 8 גרם |
137 מ"מ | 80 גרם |
1.37 מ ' |
| KCl | 0.2 גרם |
2.7 מ"מ | 2 גרם |
27 מ"מ |
| Na2HPO4 | 1.44 גרם |
10 מ"מ | 14.4 גרם |
100 מ"מ |
| KH2PO4 | 0.24 גרם |
1.8 מ"מ | 2.4 גרם |
18 מ"מ |
אופציונאלי: | ||||
| CaCl2 • 2H2O | 0.133 גרם |
1 מ"מ | 1.33 גרם |
10 מ"מ |
MgCl2 • 6H2O |
0.10 גרם | 0.5 מ"מ |
1.0 גרם | 5 מ"מ |
- ממיסים את מלחי המגיב במים מזוקקים של 800 מ"ל.
- התאם את החומציות לרמה הרצויה בעזרת חומצה הידרוכלורית. בדרך כלל זה 7.4 או 7.2. השתמש במד pH למדידת ה- pH ולא בנייר pH או בטכניקה לא מדויקת אחרת.
- הוסף מים מזוקקים כדי להשיג נפח סופי של ליטר.
עיקור ואחסון תמיסת PBS
עיקור אינו הכרחי עבור יישומים מסוימים, אך אם אתה מעקר אותו, מחלק את הפיתרון לאליקוטים ונחטט אוטומטית למשך 20 דקות במהירות של 1.0 psi (1.05 ק"ג / ס"מ)2) או השתמש בעיקור פילטרים.
יתכן כי מלוחים עם חיץ פוספטים מאוחסן בטמפרטורת החדר. זה יכול להיות גם בקירור, אך פתרון 5X ו- 10X עשוי משקעים כשהוא מקורר. אם עליך לצנן תמיסה מרוכזת, ראשית לאחסן אותה בטמפרטורת החדר עד שאתה בטוח שהמלחים התמוסקו לחלוטין. אם אכן מתרחשת משקעים, התחממות הטמפרטורה תחזיר אותם לפתרון. חיי המדף של תמיסה בקירור הם חודש.
דילול פתרון 10X לייצור 1X PBS
10X הוא פתרון מרוכז או מלאי, שעשוי להיות מדולל ליצירת תמיסה 1X או רגילה. יש לדלל פתרון 5X פי 5 בכדי לבצע דילול רגיל, ואילו יש לדלל פתרון 10X פי 10.
להכנת פיתרון עבודה 1 ליטר של 1X PBS מתמיסה 10X PBS, הוסף 100 מ"ל מתמיסת 10X ל 900 מ"ל מים. זה רק משנה את ריכוז התמיסה, לא את הכמות או הכמות הטוחנת של המגיבים. יש להשפיע על ה- pH.
PBS לעומת DPBS
פיתרון חיץ פופולרי נוסף הוא המלח המוחץ של דולבקו, או DPBS. DPBS, בדומה ל- PBS, משמש למחקר ביולוגי ומאגרים בטווח pH של 7.2 עד 7.6. ניתן לאחסן אותו בטמפרטורת החדר. הפיתרון של דולבקו מכיל ריכוז נמוך יותר של פוספט. זהו 8.1 מ"מ יוני פוספט ואילו PBS רגיל הוא 10 מ"פ פוספט. המתכון ל- 1x DPBS הוא:
| מגיב | סכום להוסיף (1x) |
| NaCl | 8.007 גרם |
| KCl | 0.201 גרם |
| נא2HPO4 | 1.150 גרם |
| KH2פו4 | 0.200 גרם |
| אופציונאלי: | |
| CaCl2• 2 ח2O | 0.133 גרם |
| MgCl2• 6 ח2O | 0.102 גרם |
ממיסים את המלחים ב 800 מ"ל מים. התאם pH ל- 7.2 עד 76 באמצעות חומצה הידרוכלורית. התאם את הנפח הסופי ל 1000 מ"ל עם מים. החיטוי החום בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 20 דקות.
מקורות
- דולבקו, ר.; et al. (1954). "היווצרות לוחית ובידוד קווים טהורים עם נגיפי פוליו-מיאליטיס". י. מומחה מד. 99 (2): 167–182.
- "מלוחים עם מאגר פוספטים (PBS." פרוטוקולי נמל קולד ספרינג (2006). עיתונות המעבדה בקור ספרינג הארבור.