פרוטוקול חיץ אלקטרופורזה 10X TBE או מתכון

TBE ו- TAE משמשים כחוצץ בביולוגיה מולקולרית, בעיקר עבור אלקטרופורזה של חומצות גרעין. מאגרי טריס משמשים בתנאי pH מעט בסיסיים, כמו לאלקטרופורזה של DNA, מכיוון שהדבר שומר על ה- DNA מסיסים בתמיסה ומונעים מחדש את הפרוטונציה כך שהיא תימשך לאלקטרודה החיובית ותעבור דרך ג'ל. EDTA הוא מרכיב בתמיסה כי זה נפוץ סוכן צ'ילציה מגן על חומצות גרעין מפני השפלה על ידי אנזימים. ה- EDTA מלטש קטיונים דו-ערכיים שהם קופקטורים לגרעינים שעלולים לזהם את הדגימה. עם זאת, מכיוון שקטיון המגנזיום הנו קופקטור לאנזימי פולימראז ה- DNA ואנזימי ההגבלה, הריכוז של EDTA נשמר בכוונה נמוכה (ריכוז של כ- 1 mM).

אינך צריך לעקר את הפיתרון. אף כי משקעים עשויים להתרחש לאחר פרק זמן, פתרון המניות עדיין שימושי. ניתן להתאים את החומציות באמצעות מד pH ותוספת טיפה של מרוכז חומצה הידרוכלורית (HCl). זה בסדר לאחסן חיץ TBE בטמפרטורת החדר, אם כי תרצה לסנן את תמיסת המניות דרך פילטר 0.22 מיקרון כדי להסיר חלקיק שיעודד משקעים.

שימוש בפתרון מלאי 5X או 10X במקרה יביא לך תוצאות גרועות מכיוון שיופק חום רב ככל האפשר. בנוסף לתת לך רזולוציה לקויה, המדגם עלול להיפגע.

instagram viewer

למרות TBE ו- TAE הם מאגרי אלקטרופורזה נפוצים, ישנם כאלה אפשרויות אחרות לפתרונות מוליכים נמוכים מולקולרית, כולל חיץ ליתיום בוראט וחיץ נתרן בוראט. הבעיה עם TBE ו- TAE היא שמאגרים מבוססי טריס מגבילים את השדה החשמלי שניתן להשתמש בו באלקטרופורזה מכיוון שמטען רב מדי גורם לטמפרטורת בורח.

instagram story viewer