Polymorphism Length Fragment Length (RFLP) היא שיטה מולקולרית לניתוח גנטי המאפשרת זיהוי של אנשים על בסיס דפוסים ייחודיים של אנזים הגבלה חיתוך באזורים ספציפיים של DNA.
המכונה גם RFLP ניתוח, הטכניקה מנצלת את ה- פולימורפיזם בקודים הגנטיים של האנשים. למרות שלכל בני המין יש למעשה איפור גנטי זהה, ההבדלים הקלים הללו מהווים שינויים בפנוטיפ, כמו מראה או מטבוליזם, בין פרטים.
טכניקת ניתוח RFLP
טכניקת ניתוח RFLP כוללת חיתוך אזור מסוים של DNA עם שונות ידועה, עם אנזימי הגבלה, ואז הפרדת שברי ה- DNA על ידי אלקטרופורזה ג'ל אגרוז וקביעת מספר השברים והגדלים היחסיים.
אנזים להגבלה הוא אנזים, מולקולת חלבון, החותך DNA באתרי הגבלה. בעיקרו של דבר, דגימת ה- DNA מתפרקת ומתעכלת על ידי אנזימי ההגבלה. השברים המתקבלים מופרדים לפי אורכם, והדפוס של גדלי השברים יהיה שונה לכל פרט שנבדק.
תהליך ה- RFLP המלא דורש תיוג בדיקה, פיצול DNA, אלקטרופורזה, כתמים, הכלאות, שטיפה ואוטרדיוגרפיה. ה- RFLP המזוהה מדמיין באמצעות סרט רנטגן באוטורדיוגרפיה, שם ניתן לראות וניתוח של שברי DNA לאחר שהם מופרדים זה מזה על ידי אלקטרופורזה.
בקשה לשימוש ב- RFLP
חלק מהיישומים לניתוח RFLP כוללים:
- טביעות אצבעות DNA: מדענים משפטי עשויים להשתמש בניתוח RFLP כדי לזהות חשודים על סמך דגימות ראיות שנאספו בזירות פשעים.
- אבהות: RFLP משמש גם לקביעת אבהות או למעקב אחר אבות.
- מגוון גנטי: ניתן להשתמש בטכניקה בחקר האבולוציה והגירה של חיות הבר, לימוד דפוסי גידול באוכלוסיות בעלי חיים וגילוי ואבחון של מחלות מסוימות.
הטכניקה של שימוש בזיהוי RFLP של שונות בגנום היא כלי חיוני במיפוי הגנום ובניתוח מחלות גנטיות. אם מחפשים את המיקום של גן מחלה מסוים בכרומוזום מסוים, החוקרים יעשו זאת נתח את ה- DNA של בני משפחה הסובלת מהמחלה, ואז חפש דפוסי ירושה דומים ב- RFLP אללים.
ברגע שגן מחלות מקומי, ביצוע ניתוח RFLP על בני משפחה אחרים עשוי לחשוף נשא של הגנים המוטנטים או לאותת על סיכון המחלה הכללי. חשוב לציין כי טכניקת ה- RFLP אינה בשימוש נרחב כעת, כאשר טכניקות חדשות וחזקות יותר משמשות לניתוח DNA במדע משפטי וכמה תחומים אחרים.
היבטים שליליים pf RFLP
לרוע המזל, טכניקת הניתוח RFLP מייגעת ואיטית. מלבד דרישה של כמות גדולה של DNA מדגימה - הדגימה בדרך כלל צריכה להיות בערך בגודל של רבע, כלומר גדול יחסית לדגימות DNA - התהליך, מתווי בדיקה ועד כביסה ואוטורדיוגרפיה, יכול לארוך עד חודש שלם עד שלם.
תוצאות מפרויקט הגנום האנושי החליפו די הרבה את הצורך ב- RFLP. הפרויקט אפשר לקבוע את כל רצף ה- DNA שנמצא בתאים אנושיים, הגנום האנושי, וזיהוי כל הגנים בגנום האנושי.