חוצץ TAE הוא פתרון המורכב מבסיס טריס, חומצה אצטית ו- EDTA (טריס-אצטט-EDTA). זה היסטורי החוצץ הנפוץ ביותר לשימוש בג'ל אגרוז אלקטרופורזה בניתוחים של מוצרי DNA הנובעים מ PCR הגברה, DNA פרוטוקולי טיהור או שיבוט DNA ניסויים.
למאגר זה חוזק יוני נמוך ויכולת חיץ נמוכה. זה המתאים ביותר לאלקטרופורזה של חתיכות DNA גדולות (> 20 קילובאז) ויהיה צורך להחליף אותן לעיתים קרובות או למחזר אותן מחדש לזמני ריצת ג'ל ארוכים יותר (> 4 שעות). עם זה בחשבון, אולי כדאי לך לשקול ליצור מספר קבוצות של המאגר.
בהתחשב בכך שהמאגר קל לבצע וניתן לבצע את הצעדים במהירות, ביצוע של יותר ממספר אחד בכל פעם לא אמור להיות זמן רב או קשה במיוחד. על פי ההוראות שלהלן, יידרשו 30 דקות בלבד כדי ליצור את המאגר.
מה שאתה צריך למאגר TAE
מכיוון שביצוע המאגר TAE דורש רק הוראות מהירות ופשוטות, מספר החומרים הדרושים לו אינו מוגזם. תצטרך רק EDTA (חומצה אתילנית-דיאמנטרה-אצטטית), מלח נתרן, בסיס טריס וחומצה אצטית קרחונית.
הפיכת החיץ דורשת גם מד pH וסטנדרטים של כיול, לפי הצורך. תצטרך גם 600 מיליליטר ו 1500 מיליליטר כוסות או צלוחיות וכן צילינדרים מדורגים. לבסוף תזדקק למים מיובנים, סורגים ומערבבים וצלחות.
בהוראות שלהלן משקל הנוסחה (המסה האטומית של כל יסוד מוכפלת במספר האטומים ואז המסה של כל אחד מתווסף יחד) מקוצרת ל- FW.
הכן פיתרון מניות של EDTA
פתרון EDTA מוכן מראש. EDTA לא תיכנס לתמיסה לחלוטין עד שה- pH יותאם לכ- 8.0. למלאי 500 מיליליטר תמיסה של 0.5 מ '(מולאריות, או ריכוז) EDTA, שוקלים 93.05 גרם של מלח נתרן EDTA (FW = 372.2). ממיסים אותו במים מילוליטרים של 400 מיליליון והתאימו את החומציות עם נתרן הידרוקסיד (NaOH). מלא את הפיתרון לנפח סופי של 500 מיליליטר.
צור את פתרון המניות שלך
הכינו תמיסת מלאי מרוכזת (50X) של TAE על ידי שקילת 242 גרם בסיס טריס (FW = 121.14) ופירוקו בכ- 750 מיליליטר מים מיונים. הוסף בזהירות 57.1 מיליליטר של חומצה קרחונית ו- 100 מיליליטר של 0.5 M EDTA (pH 8.0).
לאחר מכן יש להתאים את הפיתרון לנפח סופי של ליטר. ניתן לאחסן פתרון מלאי זה בטמפרטורת החדר. רמת החומציות של מאגר זה אינה מותאמת וצריכה להיות בערך 8.5.
הכן פיתרון עבודה של מאגר TAE
הפיתרון העובד של חיץ TAE 1x מיוצר על ידי דילול פשוט של תמיסת המניות על ידי 50X במים מיובנים. ריכוזי המומסים הסופיים הם 40 מ"מ (מילימולרי) טריס אצטט ו- 1 מ"מ EDTA. המאגר מוכן כעת להפעלת ג'ל אגרוז.
מסיימים
בדוק את המלאי לפני שתתחיל לוודא שיש לך את כל החומרים לעיל למאגר TAE. אנשי האספקה שלך צריכים להיות מסוגלים לומר לך אם יש להם את כל הפריטים שאתה צריך במלאי. אתה לא רוצה בסופו של דבר לפספס משהו באמצע ההליך.